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细胞复苏冻存和超低温冰箱存储实验方法步骤分享

2018-06-14

细胞复苏冻存和超低温冰箱存储实验方法步骤分享


    最近一直在做细胞实验,逛论坛发现很多人在细胞实验中常遇到:细胞冻存后很难复苏,或者复苏后出现大量死亡细胞。细胞的状态直接影响后续的实验,以下从细胞复苏、细胞冻存和细胞超低温冰箱存储,三个方面分享我们实验室的方法,不敢说权威,但真的总结了自己多年来的一些经验教训,供大家参考:


细胞复苏

1)75%酒精擦拭超净工作台,放置已消毒的培养瓶、吸管等,紫外线照射20min;

2)冰箱中取出冻存管并迅速放入已预热的37℃水浴锅中,不断摇动,使冻存管迅速融化(快溶过程);

3)将冻存液移至加入4mL细胞培养液的离心管中;

4)将细胞悬浮液1000rpm离心5min;

5)吸取上清液,用1mL培养液重悬细胞;

6)在细胞培养瓶中加入4mL培养基,然后将1mL细胞悬液接种至培养瓶中,轻轻混匀,将培养瓶放入CO2培养箱中培养;

7)24h小时内更换一次培养液,继续培养。


细胞冻存

1)75%酒精擦拭超净工作台,放置已消毒的培养瓶、吸管等,紫外线照射20min;

2)去除旧培养液,用PBS冲洗2次,细胞培养瓶中加入600μL胰蛋白酶,显微镜下观察细胞,若细胞回缩、细胞间隙扩大、细胞开始变圆,轻轻拍打细胞培养瓶,加入5mL培养液终止消化;

3)将细胞悬浮液转移至离心管中,1000rpm离心5min;

4)离心后的细胞,弃上清加入1.5mL预冷的细胞冻存液,混合均匀后移入冻存管中,放入细胞程序降温盒(慢冻过程),短期使用的细胞可保存于-80℃冰箱中。


细胞超低温冰箱存储

  通过上面辛苦操作得到的细胞,在存储上一定得小心,吐槽下我们实验室经历过的惨痛教训:

存储空间划分与管理

以前问题

    因为实验室人比较多,冰箱每个人存储空间划分不合理(长期被师兄师姐占领大部分空间,无力吐槽啊),大家样品都乱存乱放(划分不合理,其他人只能见缝插针了)。冰箱门反复开关,样品找寻时间过长,直接导致冰箱漏冷,且因为温度不均造成细胞反复冻融,大大降低了细胞质量。

解决办法

    1)建立相关流程及管理规则(根据大家的存储量,合理划分;定期进行冰箱样品清理,保证空间合理利用;老板牵头引起大家重视;建立惩罚措施,确保严格遵守)

    2)若实验要换置冰箱,建议购买一个智能些的

  我们实验室培养了几十株细胞,实验组五人存放冻存细胞时,选择查询“***细胞”,所有的存取位置一目了然,再打开冰箱门,直接找到位置进行取放,一步到位很方便。


 细胞复苏、冻存及存储操作一直都是细胞实验中最基础的工作,很多时候后续实验出现问题,很大一部分原因都是因为这些基础工作做的不到位,根据自己实验室条件,合理优化上述步骤与方法,相信你的细胞实验未来能更加顺利。


    低温冰箱主要用途:用于科研研究、医辽用品的保存(血浆)、生物制品(储存器官,疫苗,土样)、远洋制品、电子元件、化工材料等特殊材料的低温实验及储存等,在医院、大学、研究单位和工业存储上用得较多。



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